다양한 표준화된 독성 시험을 통해 발암성을 연구합니다. 이 테스트의 첫 번째 부분은 시험관 내에서 수행되며, 양성이면 생체 내 실험을 진행합니다. 이 실험적인 단계별 접근 방식을 DECISION POINT APPROACH라고 하며, 각 시도가 끝날 때 중지하여 시도를 어떻게 진행할지 결정하는 일련의 시도입니다. 5단계가 있습니다.
A단계: 발암성 화합물의 구조 및 특성;
PHASEB: 이 단기 체외 테스트 단계에서는 포유류 세포가 사용됩니다. 가장 일반적으로 사용되는 세포는 간세포인데, 그 이유는 물질로 인한 손상의 정도에 따라 간세포가 발달하는 손상에 대한 복구 정도를 연구하기 때문이다. 간단히 말해서, 우리는 손상 자체가 아니라 복구 시스템이 간 세포에 의해 활성화된 정도를 결정합니다.
구현된 절차는 3개의 간세포 배양물을 형성하는 것입니다.첫 번째 배양에서는 간세포가 건강하고, 두 번째 배양에서는 시험 물질로 처리되고, 마지막으로 세 번째 배양에서는 확실히 발암성이 있는 대조 물질로 처리됩니다. 이 세 가지 배양물에는 표지 역할을 하는 삼중수소 티미딘인 방사성 피리미딘 염기가 포함되어 있습니다.
검사 중인 화합물이 DNA에 돌연변이를 일으키면 세포는 복구 시스템을 활성화하여 이 문제에 대응합니다. 돌연변이가 발생한 DNA 조각을 절단하고 DNA중합효소의 작용으로 누락된 부분을 새 것으로 교체합니다.교정을 위해 DNA중합효소는 삼중수소 티미딘을 포함한 새로운 염기를 사용합니다. 방사성 염기가 포함되어 있습니다. 방사능 분석은 처리된 세포의 돌연변이 수준을 결정합니다. 방사능이 높을수록 DNA 돌연변이가 커집니다.
또한 B상에서는 역 돌연변이가 있는지 연구할 수 있도록 박테리아에 대한 테스트도 수행됩니다. 사용된 박테리아는 이미 돌연변이를 가지고 있는 살모넬라균입니다. 돌연변이는 히스티딘 합성과 관련이 있으므로 살모넬라균은 히스티딘 없이는 성장할 수 없습니다. 이 박테리아 콜로니는 부분적으로는 시험 물질로, 부분적으로는 음성 대조군으로, 부분적으로는 양성 대조군으로 처리한 다음 알려진 발암 물질로 시험합니다. 이 시험 물질이 간접 유전독성인 경우, 대사 효소를 배양 배지에 도입해야 합니다. 이 시점에서 페트리 접시에 파종되고 성장할 3개의 배양이 있습니다.(배양 배지에는 히스티딘이 없습니다.) 테스트할 발암 물질에 의한 돌연변이가 없었다면 이론상 접시에 돌연변이가 없어야 합니다. 발암물질의 돌연변이 작용이 있었다면 1차 돌연변이를 변경하고 히스티딘이 없는 배양액에서 박테리아를 증식시킬 수 있는 2차 돌연변이를 생성했을 수 있습니다. RETROMUTATION이라는 이름을 가집니다. 마지막으로, 피아스타 페트리에서 상당한 성장이 발생하면 발암 물질이 직접적입니다.
항상 체외 테스트를 통해 염색체 무결성을 결정할 수 있습니다.이 테스트는 항상 포유류 세포에서 수행되며 DNA 생합성을 담당하는 일부 효소에 돌연변이를 일으킬 수 있는 독성 물질을 테스트하는 데 사용됩니다. 시험 중인 물질이 존재하는 염색체의 완전성과 수에 영향을 미치는지 여부를 결정하기 위해 소핵 검사가 사용됩니다. 소핵은 내부에 염색질의 일부로 형성된 소포입니다. 이 소핵에 통합된 염색질은 전체 염색체 또는 염색체 단편일 수 있습니다. 소핵은 잘못된 세포 분열에 의해 형성되어 유전 물질이 동등하지 않은 딸 세포를 발생시킵니다. 이 테스트의 결과는 염색체 이상 및 방추 독으로 정의된 물질의 결정이 될 것입니다. clastogenic 물질은 염색체의 중심이 없는 단편으로 소핵을 생성하므로 물질은 염색체의 파손을 유도하지만 대신 방추의 독 물질은 생성합니다. 그 안에 전체 염색체가 존재하는 소핵.
검사 대상 물질이 1개 이상의 시험에서 유전독성을 유발하는 경우 매우 의심스러운 것으로 정의하여 바로 D상으로 진행한다. 반면에 시험물질이 유전독성 효과를 나타내지 않으면 연구단계로 넘어간다. C 프로모터가 될 수 있기 때문입니다.
FASEC: 이 단계에서 시험관 내 및 생체 내 테스트를 모두 수행할 수 있습니다.
시험관내 시험의 경우, 프로모터 물질이 정상 세포와 종양 세포 사이의 간극 접합을 깨뜨릴 가능성을 입증할 수 있었고, 결과적으로 두 세포 사이에 물질이 통과하게 되었습니다.
생체 내 테스트는 마우스에서 피부 종양의 유도입니다. 시험할 물질을 쥐의 피부에 1주일에 2~3회 도포합니다. 이 물질이 촉진제인 경우 2/3개월 이내에 유두종이 형성될 수 있습니다. 생쥐에서 두 가지 주요 데이터가 고려됩니다. 유두종의 영향을 받는 생쥐의 수와 각 동물에 존재하는 유두종의 수입니다. 물질이 프로모터로 작용하여 처리된 마우스에서 종양을 발생시킨다면 이는 실제로 프로모터 효과가 있는 물질임을 의미합니다.
이러한 테스트가 완료되면 장기 생체 내 테스트로 넘어갑니다.
FASED: 이 단계에서 돌연변이를 유발하는 모든 화합물과 돌연변이를 유발하지 않는 모든 화합물이 테스트됩니다. 수행할 수 있는 검사는 서로 다르며, 그 중 일부는 간, 폐, 마지막으로 유방에서 수행되는 검사입니다.
간 검사는 새로 형성된 종양의 형성이 아니라 종양의 초점, 따라서 종양이 될 준비를 하고 있는 종양의 형성을 보여줍니다. 이 초점의 세포는 이미 비정형 세포이므로 돌연변이를 거쳐 신생물 세포가 될 준비를 하고 있다. 일정 시간 후, 부검 검사 덕분에 이러한 전-종양 형성의 수와 범위를 계산하여 전-종양 초점의 형성이 결정됩니다.
폐 검사를 통해 "폐 조직 세포의 이상"인 샘종을 판별할 수 있습니다. 이 경우에도 쥐의 폐 조직을 상당히 오랜 시간(개월) 후에 검사합니다(이 샘종은 쉽게 식별할 수 있기 때문에 폐 상피에 희끄무레한 결절이다).
유방 검사를 통해 선 조직의 종양을 확인할 수 있습니다. 형성된 샘종의 수와 샘종을 나타내는 동물의 수는 항상 평가됩니다.
이 테스트에서 긍정적인 결과가 나오면 테스트 물질은 진정한 발암 물질입니다. 이 시점에서 우리는 실행 시간이 매우 긴 값비싼 테스트를 진행합니다.
PHASEE: 이 단계에서 20~50마리의 다양한 동물이 장기 테스트를 거칩니다. 이 테스트는 비용이 많이 들고 특정 결과를 얻는 데 오랜 시간이 걸립니다. 우리는 동물의 삶의 약 1/8에 대해 이야기합니다.이 테스트 과정에서 일부 동물이 죽을 수도 있지만 항상 부검 및 조직 학적 유형 검사를 통해 연구됩니다. 선택한 동물은 항상 쥐와 생쥐이며 장기 테스트가 끝날 때까지 70-80%만 생존합니다. 사용된 동물은 젖을 뗀 것뿐입니다. 어릴수록 치료에 더 민감합니다. 장기 테스트 기간 동안 연구원은 수집된 모든 정보를 고려하고 다양한 데이터를 재현할 수 있는 수학자-통계학자의 지원을 항상 받습니다.
동물에 대해 시험한 용량은 최대 허용 용량과 모든 하위 배수에서 시작하여 동물의 용량-반응 반응을 평가합니다.
투여는 항상 사람이 검사 중인 물질과 접촉할 수 있는 경로, 즉 경구, 피부 또는 호흡기 경로에 접근해야 하며, 약물의 발암성이 테스트되면 정맥 투여를 수행하는 것도 유용합니다.
시험된 동물 그룹은 4마리(각 그룹당 50마리):
- 치료가 없는 NAIF 그룹;
- 차량으로 처리된 그룹;
- 시험물질 처리군
- 알려진 발암물질로 치료받은 그룹.
각 그룹의 동물의 수는 최대한 동일하게 하는 것이 매우 중요하며, 실제로 동물의 수에 너무 많은 차이가 있으면 통계적 테스트가 허위로 판명될 수 있습니다.
수행되는 평가는 다음과 같습니다.
- 종양의 총 빈도;
- 일부 종양의 빈도;
- 하나 이상의 유형의 종양이 있는 동물의 빈도;
- 동물 암의 수.
이 모든 연구 단계가 끝나면 물질은 IARC(International Agency for Research and Development on Cancer)와 EPA(Environmental Protection Agency)에서 설정한 순위로 분류됩니다.
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